Ранняя диагностика рака шейки матки с помощью жидкостной цитологии.

Метод жидкостной цитологии: диагностируем наличие или отсутствия рака шейки матки без ошибок

Ранняя диагностика рака шейки матки с помощью жидкостной цитологии.

Ранняя диагностика неоплазий и рака шейки матки – важнейшее направление современной гинекологии. При этом основным методом скрининга является цитологическое исследование.

Материал для него чаще всего берут с помощью мазка или прицельной биопсии. Такой традиционный способ технически несложен, но дает до 40% ложноотрицательных результатов.

А это означает, что существует риск несвоевременного выявления рака шейки матки даже у проходящих регулярные профилактически осмотры женщин.

Метод жидкостной цитологии – более современный и информативный вариант скрининга с помощью теста по Папаниколау (ПАП-теста).

Несмотря на недавнее введение в клиническую практику, он уже признан наиболее эффективным способом ранней диагностики рака шейки матки.

Ведь результативность высокотехнологичной жидкостной цитологии достигает 95%, тогда как чувствительность традиционной методики составляет в среднем 60%, а в некоторых случаях не превышает и 40%.

Когда и кому нужны такие скрининги

Бытует мнение, что регулярное онкогинекологическое обследование необходимо проходить только женщинам, приближающимся к преклимактерическому периоду. Но это не так.

Согласно современным клиническим рекомендациями, скрининг рака шейки матки с проведением цитологического исследования рекомендован всем женщинам с 21 года. Вообще его рекомендуют начинать спустя 3 года после первого полового контакта.

Так что раннее вступление в интимную жизнь – основание для раннего начала профилактических гинекологических осмотров.

В первые 2 года скрининг на рак шейки матки проводят ежегодно.

В последующем, при отрицательных результатах повторных цитологических исследований, профилактические осмотры становятся более редкими и проводятся 1 раз в 2-3 года. После 65 лет частота скрининговых исследований определяется индивидуально.

Поводом для учащения онкогинекологических обследований является появление у женщины фоновых и предраковых заболеваний шейки матки.

При этом пациентку относят к группе высокого риска по развитию рака, а цитологическое исследование гинекологических мазков проводят ей ежегодно.

Дополнительные скрининговые мероприятия осуществляют в период подготовки женщины к зачатию.

Жидкостная цитология при беременности производится по строгим показаниям.

К ним относят выявление у пациентки изменений на шейке матки, подозрительных на предрак или злокачественную трансформацию.

Следует помнить, что такой анализ повышает вероятность угрозы прерывания беременности и может потребовать мер, направленных на нормализацию маточного тонуса.

Как подготовиться к исследованию

Подготовка к жидкостной цитологии шейки матки начинается за 2-3 дня до теста и включает:

  • половой покой;
  • отказ от спринцеваний;
  • прекращение использования любых средств для вагинального введения (свечей, таблеток, спреев).

Когда лучше делать скрининг?

Цитологическое исследование не проводят во время менструации, за 5 дней до нее и 5 дней после. Предпочтение отдается первой половине менструального цикла, хотя эта рекомендация не является строгой.

Если пациентке была проведена кольпоскопия, цитологическое исследование допустимо не ранее чем через 24 часа после нее. А в случае биопсии шейки матки – лишь по истечении 3 недель.

Как проводится жидкостная цитология

В настоящее время в клинической практике используются несколько технологических вариантов жидкостной цитологии.

Наиболее известной и востребованной из них является Becton Dickinson (BD) Sure Path™, которая была одобрена FDA в США в 1999 году, с 2004 года официально одобрена NICE в Великобритании.

С этого времени она активно внедряется в повседневную клиническую практику в странах Европы, РФ и ближнего зарубежья.

Основными этапами этого исследования являются:

  1. Забор материала. Для этого используется специально разработанная комбинированная цитощетка особой конструкции. Ее аккуратно вводят в цервикальный канал, после чего совершают вращательные движения (2 против движения часовой стрелки и 3 по ее ходу). Это обеспечивает максимально возможное и при этом малотравматичное получение поверхностно расположенных клеток слизистой оболочки шейки матки – с ее влагалищной части, из цервикального канала и прилегающих участков влагалища. Такая манипуляция не требует анестезии, ведь испытываемые женщиной ощущения не превышают болевой порог.
  2. Помещение цитощетки с полученным материалом в специальную пробирку (флакон) с особой жидкостью, что и дало название методике. Такая среда не только обладает консервирующими и стабилизирующими свойствами, но и способствует образованию суспензии с равномерным распределением клеток и других элементов по всему объему. Пробирки транспортируются в лабораторию, имеющую лицензию на проведение жидкостной цитологии и соответственно оснащенную.
  3. Автоматизированная подготовка цитопрепарата. Включает вакуумную фильтрацию порции суспензии из пробирки, центрифугирование, нанесение полученного клеточного осадка равномерным слоем на стекло-слайд, окраску по методу Папаниколау с использованием влажной фиксации.
  4. Микроскопия цитопрепарата. ПАП-тест на основе жидкостной цитологии осуществляется по тем же принципам, что и в случае традиционной методики. Но при этом учитываются особенности окраски, положения и размеров клеток после влажной фиксации цитопрепарата. Именно поэтому исследование может проводиться только прошедшим специальное обучение сертифицированным врачом-лаборантом.

Расшифровка результатов анализа производится только гинекологом или онкологом. Ответ из лаборатории может быть получен через 5-10 дней после забора материала. Но нередко этот срок удлиняется до 2-3 недель.

Скорость получения ответа зависит от времени транспортировки, загруженности лаборатории и способа информирования поликлинического звена о данных проведенных исследований.

При необходимости проводят экспресс-исследование, в этом случае врач узнает результат уже в течение первых 24 часов.

Схема проведения жидкостной цитологии шейки матки

А что после исследования?

Период восстановления после жидкостной цитологии принципиально не отличается от такового при взятии обычного мазка на онкоцитологию или биопсии шейки матки.

В течение 1,5 недель рекомендуется выдерживать половой покой, отказаться от использования вагинальных тампонов и спринцеваний.

В первые дни после теста допустимы необильные кровянистые выделения из влагалища, поэтому женщине желательно пользоваться гигиеническими прокладками.

Повышение температуры тела, продолжительные или обильные кровянистые выделения, боли внизу живота – тревожный признак. Появление таких симптомов требует скорейшего обращения к врачу.

Чем отличается жидкостная цитология от обычной

К ключевым различиям этих скрининговых методик относят:

  • При обычном цитологическом исследовании образцы тканей забирают прицельно, участки для исследования выбирается врачом на основании визуальных изменений слизистой оболочки. В случае жидкостной методики материал у любой женщины получают со всей окружности шейки матки. Это существенно снижает вероятность, что какой-либо измененный участок будет пропущен.
  • При проведении обычной цитологии биоматериал перед отправкой высушивают на стекле в условиях комнатной температуры. А при жидкостной цитологии его помещают в особую пробирку (флакон) со специальной стабилизирующей средой, что продлевает допустимый срок транспортировки и хранения полученного образца. Помещенный в пробирку биоматериал пригоден для исследования в течение нескольких месяцев и не требует создания особых условий.
  • При традиционной методике не проводится фильтрация. Поэтому при наличии в мазке воспалительных элементов, большого количества слизи и других примесей результат цитологического исследования оказывается недостаточно достоверным и обычно требует повторного проведения ПАП-теста после лечения. Этого недостатка лишена жидкостная методика.
  • При традиционной методике далеко не весь объем полученной ткани попадает на стекло и подвергается последующему исследованию. До 35-40% клеток остается на инструменте и перчатках врача. Это создает вероятность, что имеющиеся озлокачествляющиеся ткани останутся не диагностированными. При жидкостной методике такой потери биоматериала не происходит. Это обеспечивается помещением цитощетки в стабилизирующую и суспензирующую среду, последующим автоматизированным центрифугированием образца и формированием специального цитопрепарата со стандартизированным ровным слоем клеток на стекле-слайде.
  • При традиционном взятии мазка на онкоцитологию клетки на предметно стекле располагаются обычно в несколько слоев, накладываясь друг на друга и тем самым ухудшая визуализацию. Жидкостная цитология bd shurepath лишена этого недостатка, получаемый цитопрепарат является монослойным.
  • Возможность проведения повторного анализа того же биоматериала или других исследований при использовании жидкостной цитологии. Ведь суспензия в пробирке не теряет своих свойств в течение нескольких месяцев, а ее объема достаточно для получения нескольких цитопрепаратов. При традиционной методике исследуемые ткани ничем не защищены, и имеется высокий риск их повреждения при хранении.

В целом жидкостная цитология с использованием автоматического скрининга является существенно более информативной методикой по сравнению с традиционным забором мазков с шейки матки на онкоцитологию.

И основное ее достоинство – малый процент ложноотрицательных результатов онкогинекологического скрининга, что обеспечивается прогрессивными технологическими особенностями теста при строгом соблюдении правил забора биоматериала.

Диагностические возможности

Жидкостной цитологический скрининг направлен на выявление разнообразных клеточных атипий, что показывает наличие у женщины предракового состояния или рака шейки матки.

Однослойность и однородность цитопрепарата обеспечивают высокую степень визуализации, позволяя врачу-лаборанту достоверно определять характер изменений.

Это минимизирует вероятность диагностических ошибок и ложноотрицательных результатов.

Наличие суспензии и ее достаточный объем позволяют по показаниям дополнительно проводить другие исследования:

  • анализ на онкомаркеры;
  • любые ПЦР-исследования;
  • ВПЧ-тестирование;
  • иммуноцитохимические исследования с определением маркеров пролиферации.

Но жидкостная цитология не позволяет диагностировать воспалительные состояния, ведь обязательный этап фильтрации удаляет из суспензии детрит, лейкоциты и другие примеси. Поэтому при подозрении на цервицит и кольпит целесообразно параллельное взятие традиционного мазка на онкоцитологию. Это является существенным недостатком методики.

Тем не менее, жидкостная цитология по Папаниколау рекомендуется ВОЗ, FDA и мировыми противораковыми сообществами в качестве «золотого стандарта» для ранней диагностики рака шейки матки.

Но в настоящее время в РФ при проведении скрининга чаще всего используется все же традиционный мазок на онкоцитологию. Это связано в основном с недостаточным техническим оснащением поликлинического звена и отсутствием должной квалификации у врачей.

Жидкостное цитологическое исследование пока производится преимущественно крупными частными лабораториями: Гемотест, Инвитро и другими.

Источник: http://ginekolog-i-ya.ru/zhidkostnaya-citologiya.html

Ранняя диагностика рака шейки матки методом жидкостной цитологии

Ранняя диагностика рака шейки матки методом жидкостной цитологии

Ранняя диагностика рака шейки матки методом жидкостной цитологии

Ключевые слова: рак шейки матки, жидкостная цитология, скрининг

Keywords:

cervical cancer, liquid-based cytology, screening

Казаишвили Т.Н.

ГБУЗ «Центр специализированных видов медицинской помощи имени В.П. Аваева» (Тверь, Россия) 170006, Россия, Тверская область, Тверь, ул. Софьи Перовской, 56 E-mail: tkaza@bk.ru

Early diagnosis of cervical cancer by liquid-based cytology

Kazaishvili T.N.

SBOH «V. Avaev Center of specialized types of medical care» (Tver, Russia) 56, ul. Sofii Perovskoy, Tver, Tverskaya oblast, 170006, Russia E-mail: tkaza@bk.ru

Резюме

Рак шейки матки – одна из наиболее распространенных онкологических патологий.

В этой статье мы сравнили два метода цитологического исследования: традиционную и жидкостную цитологию.

Метод жидкостной цитологии является более информативным и может использоваться как самостоятельный скрининговый метод выявления заболеваний шейки матки.

Abstract

Uterus cervix cancer is one of the most widespread oncological pathologies among the female population.

In this article we compared two methods of cytologic research of material from a uterus cervix: traditional and liquid cytology.

The method of liquid cytology is more informative and can be used as an independent screening method of detection of uterus cervix diseases.

Рак шейки матки (РШМ) занимает второе место в структуре онкологической патологии среди женского населения в мире. Ежегодно регистрируется около 500 тыс. новых случаев рака шейки матки и около 250 тыс. смертельных исходов.

За последние 10 лет заболеваемость раком шейки матки в России возросла на 26%. Показатель запущенности в 2013 г. составил 36%, то есть больше трети больных обращаются уже на III, IV стадиях, когда лечение неэффективно.

Одногодичная летальность от рака шейки матки составляет 16%.

Несмотря на визуальность формы и длительный период предрака с возможностью ранней диагностики и высокоэффективного несложного органосохраняюще-го лечения, заболевание часто диагностируется на этапе глубоко инвазивного процесса, предполагающего калечащее лечение без гарантий выздоровления. Это свидетельствует об объективных нераскрытых трудностях диагностики, приводящих к расхождениям результатов диагностических тестов, их невысокой чувствительности и воспроизводимости.

Для максимальной оптимизации диагностики цер-викальной патологии и избежания субъективной интра-операционной оценки локализации и размеров участка неоплазии необходимо применение современных и внедрение новых уточняющих методов диагностики.

В настоящее время все большее распространение получает высокоэффективный метод жидкостной цитологии, который позволяет получить тонкий репрезентативный моно-слойный препарат с минимальным содержанием крови, бактерий и нейтрофильных лейкоцитов.

Влажная фиксация усиливает четкость структур, распространенные артефакты при этом отсутствуют.

Данный метод позволяет проводить иммуноцитохимическое исследование, является перспективным для выявления экспрессии маркера pl6ink4a, позволяющего дифференцировать дисплазию

онкогенной направленности от воспалительной. Чувствительность цитологического метода при применении ЖЦ возрастает до 85% и до 96% в отдельных лабораториях. Метод ЖЦ позволяет выявлять бактериальные инфекции, а также определять наличие ВПЧ.

Цель исследования – совершенствование диагностики доброкачественных, предраковых заболеваний и рака шейки матки, сопоставление традиционной и жидкостной цитологии в диагностике цервикальной патологии.

За период с 2014 по 2015 гг. на базе ГБУЗ Центра им. В. П. Аваева г.

Твери было проведено 4560 исследований цервикальных образцов, параллельно традиционным методом и методом жидкостной цитологии с приготовлением и окраской цитологического препарата по методике BD Surepath c автоматизированной системой просмотра цитологических препаратов BD Focal Point GS. Возраст пациенток составил от 18 до 65 лет. Интерпретация цитологической картины производилась согласно общепринятым критериям оценки состояния эпителия по Bethesda System,1999.

Отсутствие внутриклеточного поражения (NILM), было выявлено методом традиционной цитологии у 3658 (80,2%) пациенток, методом ЖЦ у 3369 (73,8%) обследуемых, LSIL у 249 (5,4%) и у 386 (8,5%) пациенток, HSIL у 123 (2,6%) и у 192 (4,2%) женщин методом «классической» цитологии и ЖЦ соответственно, при этом CIN II и CIN III было выявлено у 69 (1,5%) и 23 (0,5%) женщин соответственно с помощью традиционного метода и у 85 (1,9%) и 38 (0,83%) женщин соответственно с помощью метода ЖЦ. Плоскоклеточный рак у 2 (0,04%) женщин и адено-карцинома у 1 (0,02%) были выявлены обоими методами. Неинформативными оказались 1003 (22%) результатов традиционной цитологии и 19 (0,42%) результатов ЖЦ.

Таким образом, точность метода жидкостной цитологии существенно выше по сравнению с традиционным

методом. Метод жидкостной цитологии в скрининге рака шейки матки продемонстрировал возможность выявления патологического процесса на ранних этапах его развития, проведения мониторинга опухолевого процесса,

что определяет своевременность применения правильной тактики лечения. ЖЦ может использоваться как самостоятельный высокоинформативный скрининговый метод выявления заболеваний шейки матки.

Список литературы

1. Хансон К. П., Именитов Е. Н. Современные представления о канцерогенезе рака шейки матки. 2002; 3: 145-155.

2. Новик В. И. Эпидемиология рака шейки матки, факторы риска, скрининг. Практическая онкология. 2002; 3: 156-166.

3. Онкология: национальное руководство. Под ред. Чиссова В. И., Давыдова М. И. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008.

Источник: https://cyberleninka.ru/article/n/rannyaya-diagnostika-raka-sheyki-matki-metodom-zhidkostnoy-tsitologii-1

Жидкостная цитология

Одним из самых опасных заболеваний органов женской репродуктивной системы является рак шейки матки.

Ранняя диагностика этой патологии представляет собой важнейшее направление в современной медицине.

Существует несколько методов обнаружения злокачественных опухолей и предрака, одним из которых является жидкостная цитология.

Суть метода и основные показания

Что такое жидкостная цитология? Это современный инновационный вариант цитологического исследования, с помощью которого диагностируются новообразования шейки матки.

Именно этот метод позволяет выявить злокачественную опухоль или предраковое состояние на самых ранних стадиях. Благодаря этому шансы на полнейшее выздоровление увеличиваются в несколько раз.

Метод является высокоточным и опережает в эффективности классическую цитограмму на предметном стекле с окрашиванием мазка.

Суть метода жидкостной цитологии заключается в том, биологический материал помещают не на стекло, а в жидкую среду.

Специальной щеточкой производят соскоб из трех зон шейки: поверхность влагалищной части, шеечный канал, переходная зона. Биоматериал погружают в жидкость.

В лаборатории материал извлекают из пробирки с жидкой средой, клетки эпителия отмывают от различных примесей, слизи и других выделений, обогащают и наносят на предметные стекла, исследуют под микроскопом.

Затем проводят классический ПАП-тест, а при необходимости жидкостная цитология позволяет выполнить и иммуногистохимические тесты, например, поиск онкомаркера шейки матки р16. Такой способ значительно повышает точность диагноза.

Клетки шеечного отдела, пораженные дисплазией 2 и 3 степени или раком, активно продуцируют белок р16, при этом анализ ПЦР на ВПЧ может быть и отрицательным, что затрудняет диагностику. Жидкостная цитология расширяет рамки современной диагностики.

Согласно статистическим данным, классический ПАП-тест при наличии предрака дает ложноотрицательный результат в 15 – 50% случаев.

Это обусловлено методикой выполнения теста, что ведет к маскировке предраковой атипии под воспалительную. У здоровых женщин наблюдаются ложноположительные результаты в 30% случаев.

Жидкостная цитология повышает количество верных результатов до 95%.

Такой способ позволяет получить максимально «чистую» культуру клеток, благодаря чему в дальнейшем ставится наиболее точный и развернутый диагноз. С помощью жидкостной цитологии можно не только уточнить наличие или отсутствие клеток злокачественной природы, но и определить стадию заболевания.

Основными показаниями для проведения жидкостной цитологии являются:

  • наличие эрозии шейки матки.
  • очаги лейкоплакии, эритроплакии;
  • кондиломы шейки матки;
  • кисты;
  • контроль после лечения;
  • профилактическое обследование;
  • в рамках обследования на ИППП;
  • бесплодие;
  • длительный прием противозачаточных или гормональных средств;
  • наступление менопаузы.

Жидкостную цитологию рекомендуется проводить приблизительно один раз в год, так же, как и посещать гинеколога для профилактического осмотра.

Подготовка к исследованию

Для получения наиболее точных и информативных результатов исследования, пациентке необходимо пройти подготовку к проведению жидкостной цитологии эпителия шейки матки. Перед процедурой взятия мазка нужно:

  • за 2-3 суток воздержаться от половых актов;
  • исключить использование вагинальных свечей, спреев, тампонов и методов контрацепции, подразумевающих введение во влагалище;
  • сдавать анализ спустя 4 недели от окончания лечения антибиотиками, противовоспалительными и гормональными препаратами;
  • не мочиться в течение двух часов перед процедурой.

Цитологию шейки матки, а именно жидкостную цитологию проводят в определенный период менструального цикла.

Обследование не осуществляют во время кровотечения и за 5-7 дней до начала менструации.

Это связано с определенными изменениями в структуре клеток шейки матки, раскрытием отверстия цервикального канала и с высоким риском занесения инфекции.

Этапы

Жидкостная цитология шейки матки представляет собой довольно простой способ диагностики опухолевых образований. Принцип взятия мазка ничем не отличается от обычного цитологического метода, однако, дальнейшая подготовка культуры имеет свои различия.

Основные этапы проведения жидкостной цитологии.

  1. Пациентка располагается на гинекологическом кресле.
  2. Врач вводит в полость влагалища зеркала для того, чтобы шейка матки была полностью видна невооруженным взглядом.
  3. Проводится взятие соскоба с поверхности шейки, переходной зоны и цервикального канала.
  4. Биоматериал помещается в контейнер со специальным раствором. Именно поэтому метод получил название «жидкостная цитология».
  5. Далее емкость с биоматериалом помещается в аппарат, обеспечивающий очищение клеток от примесей, слизи, выделений, а также нанесение однослойной культуры клеток на стекло.
  6. Проводится детальное исследование образца под микроскопом.
  7. Лаборант делает свое заключение и передает результаты лечащему врачу.

Благодаря такой особой технике подготовки биоматериала к микроскопическому исследованию метод жидкостной цитологии обеспечивает максимально точную постановку диагноза.

Расшифровка результатов

Расшифровка результатов проведения жидкостной цитологии осуществляется только высококвалифицированным гинекологом или онкологом. Обычно спустя несколько дней, данные из лаборатории попадают к врачу. В самых редких и трудных случаях это время может увеличиться до 2-3 недель.

Итоги исследования могут иметь как отрицательный, так и положительный результат. В первом случае это говорит о том, что в эпителии шейки матки не происходит никаких злокачественных процессов.

Если же в результате жидкостной цитологии были получены положительные результаты, это говорит о наличии атипичных клеток.

Лаборант устанавливает степень заболевания, особенности и видоизменения клеток.

Стадия болезни устанавливается в соответствии с международными классификациями по ВОЗ (CIN1, CIN2, CIN3) и по Бетесда (ASCUS, LSIL, HSIL).

Выделяют несколько типов полученных результатов:

  • патологические изменения клеток не обнаружены, мазок в норме (NILM);
  • имеется несколько аномальных клеток. Это может свидетельствовать о протекающем в организме женщины воспалительном процессе – воспалительный мазок;
  • незначительные атипические изменения в одном слое эпителия (CIN1 или ASCUS);
  • атипичные клетки поражают две трети эпителиального слоя (CIN2 или LSIL);
  • эпителиальные клетки поражены во всех его слоях, атипичные клетки расположены вплоть до базальной мембраны, множественные митозы, изменение ядерно-цитоплазматического отношения, многоядерные клетки (CIN3 или HSIL). Следующей стадией является инвазивный рак.

В качестве дополнительных исследований может быть назначена кольпоскопия, повторное проведение жидкостной цитологии. Обязательным считается выполнение ПЦР анализа мазка на наличие вируса папилломы человека, а также бак посев выделений из влагалища.

При расшифровке результатов врач должен принимать во внимание объем материала, взятого для жидкостной цитологии, период менструального цикла, в котором находится женщина, а также прием различных медикаментов, которые могли исказить результаты исследования.

Преимущества метода

Жидкостная цитология является одним из ведущих методов диагностики раковых и предраковых состояний в гинекологии. По сравнению с другими методами исследования цитологических и гистологических образцов шейки матки, жидкостная цитология имеет ряд преимуществ:

  • более высокое качество и сохранение целостности отобранных культур клеток. Это обеспечивается специализированным стабилизирующим раствором, в который помещают биоматериал перед микроскопированием;
  • простота и быстрота подготовки цитологического мазка. Специальная аппаратура позволяет проводить стабилизацию и промывание сразу нескольких образцов;
  • метод позволяет окрашивать клетки в разных техниках, что дает возможность обнаружить различные вирусы, патогенные бактерии и инфекции, онкомаркеры;
  • подготовительные этапы жидкостной цитологии, а именно промывка и стабилизация препаратов, в несколько раз повышают информативность и точность мазков. Это достигается путем удаления слизи, крови и других выделений, а также отмывки образца от разрушенных клеток эпителия шейки матки;
  • образцы могут долго храниться как в лаборатории, так и при транспортировке в другое медицинское учреждение;
  • с помощью жидкостной цитологии можно получать монослойные культуры клеток. Это позволяет специалисту более детально и объективно оценить клеточное окружение, особенности структуры и строения клеток, а также предположить наличие злокачественных опухолей.

Жидкостная цитология в настоящее время считается наиболее информативным, безопасным, быстрым и точным видом диагностики рака шейки матки.

С помощью этого метода можно максимально точно определить структуру клеток, изменения в них, а также обнаружить воспалительные или инфекционные процессы, происходящие в половых органах женщины.

Источник: http://ginekola.ru/ginekologiya/shejka-matki/chto-takoe-zhidkostnaya-tsitologiya.html

Новые возможности ранней диагностики и профилактики ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки

Новые возможности ранней диагностики и профилактики ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки

ГАЛАВИТ – иммуномодулятор с доказанным противовоспалительным действием

Подробно о Галавит для врачей

в журнале:

«Медицинский совет. Генекология» 2015

В.Н. Прилепская, д.м.н., профессор, Г.Р. Байрамова, д.м.н., Е.А. Коган, д.м.н., профессор, В.Ф. Чернова, А.Н. Окушко, к.м.н.
Научный Центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. В.И. Кулакова Минздрава России, Москва

В данном обзоре рассматривается взаимосвязь вируса папилломы человека и его роль в развитии цервикальных интраэпителиальных неоплазий (CIN) и рака шейки матки.

Представлены данные о наиболее информативных методах диагностики (иммуногистохимические, молекулярно-генетические и др.

) и лечения ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки.

Ключевые слова: вирус папилломы человека, цервикальная интраэпителиальная неоплазия, жидкостная цитология, онкопротеины Е6 и Е7, р16INK4а/Ki67 двойное окрашивание, ВПЧ-тестирование, микроРНК

Рак шейки матки (РШМ) занимает первое место в структуре онкологических заболеваний женских половых органов и четвертое место среди всей онкопатологии (после рака молочной железы, колоректального рака и рака легкого) [1]. Ежегодно во всем мире регистрируется более 470 000 новых случаев рака шейки матки и более 270 000 случаев заканчиваются летальным исходом [2].

В России в 2012 г. число новых случаев РШМ составило 15 342 (6,3%), смертность от рака шейки матки – 7 371 (5,3%) случаев [1]. В последние годы РШМ все чаще встречается в молодом возрасте.

По данным ВОЗ, заболеваемость РШМ в возрастной группе 15-39 лет в мире составила 111 503 случая, в России – 3 954, в группе 40-44 года – 66 308 и 1 564 случая соответственно [1].

По данным ряда исследований, РШМ у женщин в возрасте 30-39 лет составляет 78%, в возрасте 20-29 лет – 21% и только в 1% случаев диагностирован в возрасте моложе 20 лет [3].

Эпидемиологические и молекулярно-биологические данные указывают на важную роль вируса папилломы человека в возникновении цервикальных интраэпителиальных неоплазий и рака шейки матки [4].

Почти в 100% случаев у больных РШМ, подтвержденным гистологическим методом исследования, выявляется вирус папилломы человека (ВПЧ) высокоонкогенных типов. В настоящее время общепризнанным считается, что ВПЧ является одним из ведущих факторов развития РШМ.

По данным C.M. Wheeler и соавт. (2006) через 3 года после инфицирования ВПЧ CIN II-III развивается у каждой четвертой женщины (27%) [5]. В России папилломавирусная инфекция диагностируется у 15,5% женщин, в США – у 28,6%, в Европе – 2-12% [6].

Вирус папилломы человека – ДНК-содержащий вирус, в состав которого входят два структурных гена (L1 и L2) и семь функциональных генов (E17). Известно более 200 типов ВПЧ, более 40 из них способны поражать слизистые оболочки половых органов [7].

ВПЧ подразделяются на высокоонкогенные (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 46, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) и низко-онкогенные (6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81) типы вируса. Исследования L. Giannella и соавт.

(2015) [8] показали, что у женщин с гистологически верифицированным диагнозом CIN 3 в 63,6% случаев выявляется ВПЧ 16 типа, в 7% – ВПЧ 33 типа, в 6,2% случаев – ВПЧ 18 типа и в 5,4% – ВПЧ 31 типа.

Вместе с тем авторы показали, что ВПЧ 16 типа чаще встречается в возрасте до 35 лет [8]. В ряде исследований показано, что в 70% случаев инвазивный РШМ обусловлен ВПЧ 16 и 18 типов [9].

Эпидемиологические и молекулярно-биологические данные указывают на важную роль вируса папилломы человека в возникновении цервикальных интраэпителиальных неоплазий и рака шейки матки. Почти в 100% случаев у больных РШМ, подтвержденным гистологическим методом исследования, выявляется вирус папилломы человека высокоонкогенных типов

Особенностью ВПЧ-инфекции является тот факт, что в силу эпителиотропности вируса он не обнаруживается в крови, а выработка антител иммунной системой отмечается далеко не у всех инфицированных больных [10].

При этом уровень антител очень низок и не способен обеспечить длительный и надежный иммунитет.

Это связано со способностью ВПЧ «ускользать» от иммунной системы макрорганизма, что позволяет ему длительно персистировать ввиду своих эволюционно приобретенных особенностей (репликационный цикл ограничен эпителием, нет виремии и цитолиза, локальная иммуносупрессия за счет вирусных белков) [11, 40]. Течение ВПЧ-инфекции зависит от состояния иммунной системы, одно из самых неблагоприятных течений – персистенция вируса [12, 41]. Персистенция высокоонкогенных типов ВПЧ более двух лет является наиболее опасным фактором прогрессии предрака шейки матки. При персистенции ВПЧ 16 типа риск развития CIN составляет 40-50%; при выявлении ВПЧ 26 типа – 30-40%; 31, 58, 82 типов ВПЧ – 20-30%; 18, 33, 35, 51, 52 типов ВПЧ – 10-20% [13].

Учитывая высокую распространенность РШМ, показатели заболеваемости которого занимают третье место в мире среди женщин репродуктивного возраста [14], диагностика предраковой патологии шейки матки на стадии интраэпителиальной неоплазии является глобальной актуальной проблемой. В настоящее время разработка методов и систем ранней диагностики CIN является первостепенной задачей здравоохранения.

Для ранней диагностики CIN широко применяют цитологический метод Pap-тест и молекулярные методы выявления ДНК ВПЧ [15, 42].

Во многих странах с целью ранней диагностики и снижения заболеваемости РШМ разработаны скрининговые программы, включающие рутинное проведение цитологического метода исследования Pap-тест (тест по Папаниколау).

В настоящее время в странах Европы и США цитологическое исследование рекомендовано проводить 1 раз в 3 года, начиная с возраста 21 год или спустя 3 года от начала половой жизни [16].

В России на сегодняшний день нет четкой программы организованного цитологического скрининга РШМ. Приказом Министерства здравоохранения РФ от 12.11.

2012 №572н регламентированы лишь общие положения о целесообразности проведения ежегодных профилактических осмотров женщин с цитологическим исследованием мазков с экзо- и эндоцервикса.

Диагностика ВПЧ-ассоциированных заболеваний шейки матки должна быть комплексной и базироваться на проведении ряда исследований: выявление ДНК ВПЧ с помощью реакции гибридизации вирусной ДНК с РНК-зондом (Digene-тест, Cobas HPV Test), выявление ДНК ВПЧ с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с типированием и определением количества геномных эквивалентов вируса; цитологическое исследование (традиционная или жидкостная); определение онкопротеинов Е6 и Е7; оценка экспрессии онкопротеинов p16/Ki67 иммуноцитохимическим (ИЦХ), иммуногистохимическим (ИГХ) методами; расширенная кольпоскопия; гистологическое исследование биоптата шейки матки.

Однако на сегодняшний день данные о специфичности и чувствительности всех перечисленных методов неоднозначны.

Digene-тест позволяет выявить не только наличие ВПЧ, но и определить его клинически значимую концентрацию, что дает возможность клиницистам оценить прогноз и выработать тактику ведения пациента.

Другим международным референтным тестом, который также используется для генотипирования ВПЧ, является тест-система Cobas.

Данный метод обеспечивает качественную детекцию 14 высокоонкогенных типов ВПЧ: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68, а также генотипирование ВПЧ 16 и 18 типов в этом же анализе [17]. S. Phillips и соавт.

(2015) провели сравнительный анализ ВПЧ-тестирования 407 образцов с гистологически подтвержденным диагнозом CIN различной степени тяжести на тест-системах Cobas и Digene.

Показана корреляция между степенью тяжести плоскоклеточных интраэпителиальных поражений и наличием ВПЧ высокоонкогенных типов – чувствительность тест-системы Cobas составила 90,6%, Digene-теста – 86,1%, специфичность – 92,9 и 91,8 соответственно [18].

По данным Американского общества по кольпоскопии и цервикальной неоплазии (ASCCP), внесены изменения в рекомендации для первичного скрининга: Cobas-тест был одобрен для первичного скрининга женщин старше 25 лет с цитологическим заключением ASCUS (атипические клетки плоского эпителия неясного значения), а также может быть использован у женщин старше 30 лет с отсутствием патологических изменений по данным цитограммы [19].

Особенностью ВПЧ-инфекции является тот факт, что в силу эпителиотропности вируса он не обнаруживается в крови, а выработка антител иммунной системой отмечается далеко не у всех инфицированных больных. При этом уровень антител очень низок и не способен обеспечить длительный и надежный иммунитет

В нашей стране также используется метод ПЦР диагностики в режиме реального времени, который позволяет провести генотипирование и количественное определение 21 типа ВПЧ (HPV КВАНТ – 21) – 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82, 6, 11. Метод основан на реакции амплификации, в ходе которой молекулы праймеров связываются с фрагментами ДНК вируса в образце и в среде с добавлением катализаторов, под воздействием температуры происходит образование дочерних комплементарных двухцепочечных молекул ДНК. Метод ПЦР в реальном времени отличается тем, что после каждого цикла амплификации производится подсчет количества амплифицированной ДНК.

По данным ряда авторов, для определения дисплазии высокой степени и РШМ необходимо проводить цитологическое исследование в сочетании с тестированием на ВПЧ, чувствительность достигает более 96% [20].

В последние годы помимо традиционной цитологии активно внедряется жидкостная цитология (ЖЦ) – высокоспецифичный метод.

Компьютеризированная система скрининга РШМ на основе жидкостной цитологии способствует обеспечению качества забора, хранения и транспортировки материала, качества приготовления и окраски препаратов и оптимизации использования рабочего времени цитолога при просмотре препаратов. Внедрение в практику метода жидкостной цитологии позволит сохранить все забранные клетки и исключить возможность потери образца [21, 22]. Кроме того, один и тот же образец, взятый для ЖЦ, может быть использован для детекции ВПЧ высокого онкогенного риска и определение ИЦХ методом онкомаркеров CIN.

Известно, что пусковым моментом неопластического процесса шейки матки является интеграция ВПЧ в геном клетки-хозяина, в ходе которого нарушается считывание генов Е1 и Е2, регулирующих экспрессию онкопротеинов Е6 и Е7.

Экспрессия специфических онкобелков Е6 и Е7 является необходимым условием злокачественного роста цервикальных клеток.

Установлено, что гены Е6 вызывают деградацию белков-супрессоров генов р53 и ВАХ, предотвращают апоптоз и деградацию тирозин-киназы, активацию теломеразы и подавляют выработку интерферона [24].

Е7 взаимодействует с продуктами гена-супрессора ретинобластомы (RB) и способствует высвобождению транскрипционного фактора E2F, стимуляции клеточной пролиферации, синтезу р16 (К4а) [25].

Исследования ряда авторов показали, что обнаружение м-РНК, кодирующих онкопротеины Е6 и Е7 вируса папилломы человека высокого онкогенного риска, является более специфическим предиктором персистирующей инфекции, чем обнаружение ДНК ВПЧ [26, 27].

По данным F. Karlsen (2009), специфичность показателей онкопротеинов Е6 и Е7 для LSIL (низкая степень плоскоклеточного интраэпителиального поражения) составляет 80% [28]. Доказано, что экспрессия онкопротеина Е7 коррелирует со степенью тяжести неопластического процесса шейки матки [29].

Чувствительность кольпоскопии для определения субклинической ПВИ, предрака и рака шейки матки составляет 80-90%, специфичность 30-60%. К преимуществам данного метода можно отнести возможность прицельной биопсии с наиболее подозрительных участков шейки матки для дальнейшего гистологического исследования с целью подтверждения или опровержения неопластического процесса

В последние годы одним из перспективных методов диагностики ВПЧ-ассоциированных поражений шейки матки является определение экспрессии маркеров пролиферации р16 и Ki 67, которые в свою очередь позволяют определить не только наличие вирусных белков в клетке, но и степень нарушений клеточной регуляции в ответ на персистенцию вируса в клетке. Известно, что белок р16 (INK4A) [30, 43] является продуктом гена CDKN2A и подавляет активность циклин-зависимых киназ 4 и 6, которые регулируют G1-фазу клеточного цикла. Экспрессия этого белка в нормальных клетках ограничена, однако при ВПЧ-инфекции онкобелок Е7 связывается с белком супрессором опухолей ретинобластомой (RB), что приводит к деградации последней и, как следствие, к избыточной экспрессии р16 [25]. Выявление атипичных клеток плоского эпителия шейки матки, экспрессирующих одновременно р16 и маркер пролиферации Ki67, указывает на индуцированное дисрегулирование клеточного цикла и обеспечивает более точную диагностику поражений высокой степени тяжести. Первые исследования по определению р16 и Ki67 показали высокую специфичность метода [31]. H. Ikenberg и соавт. (2013) провели обследование 27 349 женщин из 196 медицинских центров в возрасте от 18 до 65 лет (средний возраст 39,9±11,4 года), которым был проведен цитологический скрининг, ВПЧ-тест и определение экспрессии р16 и Ki67 иммуно-гистохимическим методом. Пациенткам с аномальными цитологическими мазками и/или положительным ВПЧ-тестом, и/или положительной экспрессией р16 и Ki67 выполнялась расширенная кольпоскопия (n=2301) и прицельная биопсия шейки матки (по показаниям). Диагноз CIN2+ был установлен в 205 биоптатах шейки матки. При этом окраска цитологических препаратов двойным иммуноцитохимическим методом показала наибольшую чувствительность по сравнению с мазком, окрашенным гематоксилин-эозином – 86 и 68,5% соответственно (р

Источник: https://medi.ru/info/993/

Энциклопедия Здоровья
Добавить комментарий